大鼠ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。
elisa試劑盒的敏感性,在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~0μg/ml,免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍,達ng/ml水平。例如,用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg,其敏感度可達0.ng/ml。
在elisa試劑盒原理中,免疫測定在臨床檢驗中的應(yīng)用由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣。