大鼠,4,5-三磷酸肌醇(IP3)試劑盒樣本處理及要求:
. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 000×g離心5分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.0M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按:9的重量體積比,比如g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整,并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~0分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
[需要而未提供的試劑和器材]
.酶標儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水