當前位置：Elisa試劑盒的測試需要滿足哪些要求？
點擊次數(shù)：751 更新時間：2020-06-27
Elisa試劑盒的測試要求：
做好對照
正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
實驗條件的選擇
在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
() 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 8～24小時。蛋白質(zhì)包被的較適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.、.0和0μg/ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值較大而蛋白量較少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為～0μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以0-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
進口分裝：
檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。
試劑盒的標準曲線較高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.0以下。
試劑盒的標準曲線相關系數(shù)R≥0.98。
試劑盒重復性好，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。
試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。
檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結(jié)果的重復性。
白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種抗體形成系統(tǒng),它的生理特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協(xié)同作用的生長的刺激等,也備受關注. 并且已證實白介素-6與病理學存在穩(wěn)定的相關關系.例如,報道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 0.94的 700 pg/mL 預期用途
